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      深入了解下紫外分析儀的技術原理

       發布時間:2022-08-24 點擊量:166
        紫外分析儀有三用紫外分析儀、暗箱式紫外分析儀、可照相紫外分析儀等系列,不同的紫外分析儀有不同的用途。紫外分析儀采用不同波長引進電泳分析、檢測,PCR產物檢測,DNA指紋圖譜分析,紙層分析或薄層分析等。
       
        紫外分析儀是熒光技術的應用,熒光技術是什么呢?首先了解一下什么是熒光,熒光又作"螢光",是指一種光致發光的冷發光現象。當某種常溫物質經某種波長的入射光(通常是紫外線或X射線)照射,吸收光能后進入激發態,并且立即退激發并發出比入射光的的波長長的出射光(通常波長在可見光波段);而且一旦停止入射光,發光現象也隨之立即消失。具有這種性質的出射光就被稱之為熒光。知道了什么是熒光,顧名思義就能想到什么是熒光技術。熒光技術是某些物質受一定波長的光激發后,在較短時間內(10-8秒)會發射出波長大于激發波長的光,這種光稱為熒光。這一發光現象在各方面的應用及有關的方法稱為熒光技術。
       
        熒光技術在生物化學及分子生物學研究中應用主要包括以下幾個方面:
       
        1、物質的定性:不同的熒光物質有不同的激發光譜和發射光譜,因此可用熒光進行物質的鑒別。與吸收光譜法相比,熒光法具有更高的選擇性。
       
        2、定量測定:利用在較低濃度下熒光強度與樣品濃度成正比這一關系可以定量分析樣品中熒光組分的含量,常用于測定氨基酸、蛋白質、核酸的含量。熒光定量測定的一個優點是靈敏度高,例如維生素B2的測定可達1毫微克/毫升,這一優點使測定時所需要樣品量大大減少。這種定量測定方法還可應用于酶催化的反應,只要反應前后有熒光強度的變化,就可用來測定酶的含量及酶反應的速率等。
       
        3、研究生物大分子的物理化學特性及其分子的結構和構象:熒光的激發光譜、發射光譜、量子產率和熒光壽命等參數不僅和分子內熒光發色基團的本身結構有關,而且還強烈地依賴于發色團周圍的環境,即對周圍環境十分敏感。利用此特點可通過測定上述有關熒光參數的變化來研究熒光發色團所在部位的微環境的特征及其變化。在此研究中,除了利用生物大分子本身具有的熒光發色團(如色氨酸、酪氨酸、鳥苷酸等,此類熒光稱為內源熒光)以外,可將一些特殊的熒光染料分子共價地結合或吸附在生物大分子的某一部位,通過測定該染料分子的熒光特性變化來研究生物大分子,這種染料分子被稱為"熒光探針",它們發出的熒光一般稱為外源熒光。熒光探針的應用,大大地開拓了熒光技術在分子生物學中的應用范圍。
       
        4、利用熒光壽命、量子產率等參數可以研究生物大分子中的能量轉移現象:通過該現象的研究,可以獲得生物大分子內部的許多信息。
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